腮腺組織消化手冊

更新時間：2016-02-16

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Worthington組織消化指南

引言

組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細胞生物學研究的原代細胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經普遍應用多年，但是對其組織消化和細胞收集的作用機制卻沒有全面的理解。由此導致的結果便是選擇一種消化方法大多是隨機選擇或基于過去的經驗，而不是在*理解消化原理的基礎上選擇的消化方案，以及如何根據具體實驗目的修正消化方案以獲得更好的實驗結果。

細胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個細胞，而影響結果的原因有很多，包括（不限于）以下：

1、組織類型

2、物種來源

3、動物年齡

4、遺傳改造情況（如knockouts）

5、所用的消化培養(yǎng)液

6、所用的酶

7、消化酶中的雜質

8、所用消化酶的工作濃度

9、溫度

10、孵育時間

通常前四個原因沒辦法選擇，而剩下的原因一般由經驗決定以獲取zui適實驗結果。

通過查閱文獻來選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實驗數據搞得一頭霧水。這些巨大差異來源于組織胞外基質的復雜而動態(tài)的特性，以及過去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外，組織胞外基質由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成，這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育（年齡）之間存在明顯的差異，這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶，如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。

本指南總結了目前常用組織消化酶的zui適消化和細胞收集知識和方法，描述了標準的實驗步驟，以便于制定一個*的細胞分離方案，同時列舉了一些相關的參考文獻。

下表列出多種組織的適宜消化酶（含參考文獻，以組織類型和物種分類，詳見鏈接）

脂肪組織	腎上腺組織	骨組織	腦組織
軟骨組織	結腸組織	內皮組織	上皮組織
眼	心臟	腸	腎
肝	肺	淋巴結	乳腺
其它組織	其他組織	肌組織	神經組織
胰腺	腮腺	垂體	前列腺
生殖	動物鱗片	皮膚	脾臟
干細胞	胸腺	甲狀腺/甲狀旁腺	扁桃體
腫瘤

注：使用Worthington公司消化酶的文獻不限于上表鏈接中所列，一般而言，Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。

腮腺組織消化手冊

物種	詳細來源	細胞名稱	消化用酶	培養(yǎng)基	參考文獻
小鼠	小鼠	Parotid and sublingual glandular	Neutral Protease: 50 u/ml	PBS	Ogawa, M., Oshima, M., Imamura, A., Sekine, Y., Ishida, K., Yamashita, K., Nakajima, K., Hirayama, M., Tachikawa, T. and Tsuji, T.: Functional Salivary Gland Regeneration by Transplantation of a Bioengineered Organ Germ., Nat Commun 4, 2498, 2013
			Collagenase Type 1: 100 u/ml
大鼠	Wistar大鼠, 雄性, 130 克	Acinar	Collagenase: 75 u/ml	RPMI 1640	Looms, D., Dissing, S., Tritsaris, K., Pedersen, A. and Nauntofte, B.: Adrenoceptor-Activated Nitric Oxide Synthesis in Salivary Acinar Cells., Adv Dent Res 14, 62, 2000
			Hyaluronidase: 153 u/ml
大鼠	SD大鼠, 100-120 克	Parotid acinar cells	Collagenase Type 2: 90 u/ml	Krebs-Henseleit Bicarbonate	D'Silva NJ, DiJulio DH, Belton CM, Jacobson KL, Watson EL: Immunolocalization of Rap1 in the rat parotid gland: detection on secretory granule membranes, J Histochem Cytochem 45, 965-73, 1997
大鼠	SD大鼠, 雄性	Epithelial	Collagenase: 50-75 u/ml	HBSS CF	Prasad, K.N., Edwards-Prasad, J., Carvaiho, I., LaRosa, F.G., Baibinder, E., Meyers, A., and Quissell, D.: Establishment of Primary Cultures of Rat and Human Parotid Epithelial Cells for Transfection Experiments, In Vitro Cell Dev Biol 28, 493, 1992
			Hyaluronidase: 0.1%
大鼠	SD大鼠, 雄性, 100-150 克	Parotid acinar	Trypsin: 0.001%	F12 medium	Yeh, C., Mertz, P., Oliver, C., Baum, B., and Kousvelari, E.: Cellular Characteristics of Long-Term Cultured Rat Parotid Acinar Cells, In Vitro Cell Dev Biol 27, 707, 1991
大鼠	Wistar大鼠, 雄性	Parotid acinar	Trypsin: 0.02%	Solution B	Foskett, J., Roifman, C. and Wong, D.: Activation of Calcium Oscillations by Thapsigargin in Parotid Acinar Cells, J Biol Chem 266, 2778, 1991
				(See reference)
大鼠	大鼠	Parotid	Hyaluronidase: 0.025%	HBSS with 20mM HEPES	Takuma, T. and Ichida, T.: Amylase Secretion From Saponin-Permeabilized Parotid Cells Evoked by Cyclic AMP, J Invest Dermatol 103, 95, 1988
大鼠	Wistar大鼠, 雄性, 250 - 350 克	Acinar, parotid	Hyaluronidase: 0.015%	Earle's MEM	Melvin, J., Kawaguchi, M., Baum, B., and Turner, R.: A Muscarinic Agonist-Stimulated Chloride Efflux Pathway is Associated With Fluid Secretion in Rat Parotid Acinar Cells, Biochem Biophys Res Commun 145, 754, 1987
大鼠	SD大鼠, 雄性, 50 - 125 克	Acinar	Trypsin: 0.01%	HBSS, CMF	Oliver, C., Waters, J., Tolbert, C., and Kleinman, H.: Growth of Exocrine Acinar Cells on a Reconstituted Basement Membrane Gel, In Vitro Cell Dev Biol 23, 465, 1987
		Exorbital lacrimal, parotid, pancreas
大鼠	SD大鼠, 白化變種, 雄性, 150-200 克	Acinar, parotid	Trypsin: 0.01%	HBSS CMF	Mangos, J., McSherry, N., Butcher, F., Irwin, K., and Barber, T.: Dispersed Rat Parotid Acinar Cells (Morphological, Functional Character), Am J Physiol 229 (3), 560, 1975
			Collagenase: 40-50 u/ml
			Hyaluronidase: 0.10%

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