spherotech SPHERO簡介

羥基顆粒用于促進免疫分析的發展，以及蛋白質、細胞或各種目標分析物的定量、分離、純化和表征。為了提供羥基的好處，Spherotech提供SPHEROTM羥yi基（HEMA）/聚苯乙烯共聚物磁粉。這些共聚物顆粒提供親水表面，減少固定化蛋白質的變性。此外，羥yi基基團與水溶液中的一層水形成氫鍵，防止顆粒聚集。這兩個特征轉化為更長的配體穩定性，更低的非特異性

結合電位，與表面疏水性更強的顆粒相比，具有更穩定的顆粒溶液。盡管羥基不會自發地與生物分子上的官能團發生反應，但它們可以通過許多已知的反應機制被激活進行共價偶聯。該反應導致配體的共價連接，并且可以在水或非水條件下進行。通過利用非水條件，可防止活化劑和中間基團的水解。為了促進與羥yi基表面的共軛，可以使用交聯劑在粒子和共價偶聯的配體之間形成間隔臂。各種交聯劑已成為*的工具

用于制備用于許多免疫分析、蛋白質分離和鑒定協議的包衣珠。常見和有效的交聯劑是異雙功能交聯劑，它具有兩個反應性基團。雜雙功能交聯劑在分子共軛過程中提供更好的控制和定向，以減少二聚體和聚合物的生成。仔細選擇配體、固定化化學和配體密度將有助于產生適合特定應用所需生物活性的選擇性和靈敏度。

PMPI或對馬來酰亞胺苯基異氰酸酯是一端帶有異氰酸酯基團，另一端帶有馬來酰亞胺基團的異雙功能交聯劑。因此，它用于促進硫化配體與配體的共軛

羥yi基珠表面。傳統上，PMPI用于將硫化蛋白質或肽與碳水化合物、類固醇或維生素1交聯。PMPI對水分非常敏感，需要在非水系統中溶解。信息技術

不能與緩沖液一起使用，但可溶于甲苯和己烷，也可與二氯甲烷反應。

在此，我們提出了一種方法，適用于使用PMPI將巰基化配體交聯到球形羥yi基（HEMA）/聚苯乙烯共聚物磁粉上。

其他方便的活化方法使用化合物在羥基顆粒上形成活性羰基

如羧基二咪唑（CDI）或碳酸二丁二酰亞胺（DSC）。這些活化劑生成咪唑氨基甲酸酯（CDI）或NHS碳酸鹽（使用DSC），然后它們會自發地與胺反應。在里面

在CDI的情況下，咪唑氨基甲酸酯也會自發地與巰基發生反應。由于這些活化試劑的任何部分都不會成為共軛分子和羥基珠之間最終鍵的一部分，

它們被認為是零長度交聯劑（2,3）。本文描述了使用CDI和DSC的詳細耦合協議。然而，Spherotech建議優化質量試劑和偶聯條件，因為兩者都會影響配體與功能化珠表面偶聯的質量

材料：

1.HEMA-300-10（HEMA/聚苯乙烯共聚物磁粉，1%w/v，25-37μm，10 mL）

2.對馬來酰亞胺苯基異氰酸酯（PMPI）

3.磷酸鹽緩沖鹽水，0.1M，pH值7.4（PBS）

4.二甲基亞砜（DMSO）

5.乙腈

6.具有巰基（–SH）反應性化學基團的化合物