haemtech HCI-0150R說(shuō)明書

Fibrinogen and Fragments

纖維蛋白原和碎片

纖維蛋白原
的域結(jié)構(gòu)顯示了Aα，Bβ和γ鏈的三角結(jié)構(gòu)，釋放FPA和FPB的IIa裂解位點(diǎn)（IIa）以及產(chǎn)生D片段和E片段的纖溶酶裂解位點(diǎn)（Pm）。

凝血酶（IIa）催化的可溶性纖維蛋白原（Fbg）裂解形成纖維蛋白（Fbn）是凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)中的終蛋白水解事件。這些可溶性Fbn單體自發(fā)聚合形成不溶性Fbn網(wǎng)絡(luò)，該網(wǎng)絡(luò)通過(guò)因子X(jué)IIIa催化的α和γ鏈的lys和glu殘基交聯(lián)而穩(wěn)定。Fbn網(wǎng)絡(luò)是止血栓的主要蛋白質(zhì)成分。

血漿纖維蛋白原是肝臟中合成的大糖蛋白（Mr = 340,000），濃度為2.6 mg / ml。它是由三對(duì)二硫鍵連接的不同多肽鏈（Aα，Bβ和γ）組成的二硫鍵連接的二聚體。Aα鏈的顯著特征是N端肽（纖維蛋白肽A（FPA，1-16）），XIIIa因子交聯(lián)位點(diǎn)和2個(gè)磷酸化位點(diǎn)。合成時(shí)，F(xiàn)bg被*磷酸化，但僅以20-30％的磷酸化水平循環(huán)。Bβ鏈包含纖維蛋白肽B（FPB，1-14），3個(gè)N-連接的碳水化合物部分（Mr = 2500）之一和N-末端焦谷氨酸。γ鏈包含另一個(gè)N-連接的糖基化位點(diǎn)和XIIIa因子交聯(lián)位點(diǎn)。2個(gè)伸長(zhǎng)的亞基（（AαBβγ）2）以反平行的方式排列，形成6條鏈的三點(diǎn)狀排列。節(jié)點(diǎn)由3條平行鏈之間的二硫環(huán)形成。中心節(jié)點(diǎn)（n-二硫鍵結(jié)，E結(jié)構(gòu)域）由通過(guò)11個(gè)二硫鍵連接在一起的所有6條鏈的N-末端形成。該區(qū)域包含2個(gè)IIa敏感位點(diǎn)。通過(guò)在R16-G17處裂解釋放的FPA產(chǎn)生Fbn I，從而暴露Aα鏈上的聚合位點(diǎn)（17-20）。這些區(qū)域與Fbn的D結(jié)構(gòu)域上的互補(bǔ)區(qū)域結(jié)合形成原纖維。隨后，F(xiàn)PB（R14-G15）從Bβ鏈的IIa裂解暴露出額外的聚合位點(diǎn)，并促進(jìn)Fbn網(wǎng)絡(luò)的橫向生長(zhǎng)。通過(guò)在R16-G17處裂解釋放的FPA產(chǎn)生Fbn I，從而暴露Aα鏈上的聚合位點(diǎn)（17-20）。這些區(qū)域與Fbn的D結(jié)構(gòu)域上的互補(bǔ)區(qū)域結(jié)合形成原纖維。隨后，F(xiàn)PB（R14-G15）從Bβ鏈的IIa裂解暴露出額外的聚合位點(diǎn)，并促進(jìn)Fbn網(wǎng)絡(luò)的橫向生長(zhǎng)。通過(guò)在R16-G17處裂解釋放的FPA產(chǎn)生Fbn I，從而暴露Aα鏈上的聚合位點(diǎn)（17-20）。這些區(qū)域與Fbn的D結(jié)構(gòu)域上的互補(bǔ)區(qū)域結(jié)合形成原纖維。隨后，F(xiàn)PB（R14-G15）從Bβ鏈的IIa裂解暴露出額外的聚合位點(diǎn)，并促進(jìn)Fbn網(wǎng)絡(luò)的橫向生長(zhǎng)。

中心節(jié)點(diǎn)（E域）和C端節(jié)點(diǎn)（D域）之間的2個(gè)域中的每個(gè)域均由彼此纏繞的Aα，Bβ和γ鏈的平行α螺旋區(qū)域組成，形成“線圈”極性殘基朝外，非極性殘基形成疏水核。在該區(qū)域中，所有3條鏈均具有蛋白酶（纖溶酶）敏感位點(diǎn)。另一個(gè)主要的纖溶酶主要敏感位點(diǎn)是來(lái)自C端節(jié)點(diǎn)的α鏈的親水性擾動(dòng)。在這些位點(diǎn)上受控的纖溶酶降解將Fbg轉(zhuǎn)化為片段D和片段E。通過(guò)鹽分餾，凝膠過(guò)濾和離子交換色譜分離各個(gè)片段。將片段凍干以供儲(chǔ)存在4℃下。高度純化的研究級(jí)纖維蛋白原（> 95％可凝塊）是通過(guò)常規(guī)技術(shù)和親和力技術(shù)的組合制備的。它以檸檬酸磷酸鹽的冷凍溶液形式提供，可在-80°C下儲(chǔ)存。

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