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haemtech HCII-0190說明書

發布時間:2018/11/3點擊次數:476

 

 

haemtech Haematologic Technologies,Inc。(HTI/haemtech)是一家ISO 9001:2015注冊公司,是一家專業從事體外研究用高質量血漿蛋白分離和表征的主要制造商。HTI的重點是凝血級聯中涉及的蛋白質,以及骨代謝的調節。HTI產品系列包括超過150種高度純化和充分表征的蛋白質,包括酶原,酶,輔因子和抑制劑,以及單克隆和多克隆抗體的互補系列。還可提供因子缺乏的等離子體和定制的血液采集管,用于臨床研究。提供的服務包括定制蛋白質純化,蛋白質修飾,化驗開發,合同制造和合同研究。

haemtech HCII-0190說明書

Human Heparin Cofactor II

人肝素輔助因子II

肝素輔因子II抑制凝血酶
凝血酶(IIa),肝素(HEP)和肝素輔因子II(HCII)通過隨機順序雙反應機制相互作用形成三元復合物。隨著凝血酶與肝素輔助因子II形成共價復合物,肝素隨后從復合物解離。

 

HCII-0190 Human Heparin Cofactor II

Size

100µg

Formulation

50% (vol/vol) Glycerol/H2O

Molecular Weight

 

 

Storage

-20°C

Purity

>95% by SDS-PAGE

Compound

 

 

Assay

Thrombin inhibition

Shelf Life (properly stored)

12 months

Chemical Formula

 

 

肝素輔助因子II(HCII)(肝素輔助因子A,抗凝血酶BM,硫酸皮膚素輔因子,人類leuserpin-2)是絲氨酸蛋白酶抑制劑(絲氨酸蛋白酶抑制劑)家族的單鏈糖蛋白(Mr = 65,600,10%碳水化合物)成員(1- 3)。肝素輔因子II的氨基酸序列分析顯示3個潛在的N-糖基化位點和2個位于NH2-末端附近的7個殘基的兩個內部重復的硫酸化酪氨酸(4-6)。血漿濃度估計為90μg/ ml(2)。

在凝血級聯中,肝素輔助因子II通過在存在(k2 = 4.5×10 8 M -1 min -1)和不存在(k2 = 5.0×10 5 M -1 min -1)的情況下形成雙分子復合物來抑制凝血酶。)肝素(2,7-9)。這種復合物對變性劑是穩定的并且基本上是不可逆的。除肝素外,多種多陰離子化合物可加速HCII對凝血酶的抑制作用(3)。在這些化合物中值得注意的是硫酸皮膚素,其加速HCII對凝血酶的抑制,但不加速抗凝血酶III(1,6)。該特征已被用于開發特異于肝素輔助因子II的基于血漿的測定。盡管HCII與其他serpins僅顯示約25%的序列同源性,但凝血酶抑制時釋放的反應位點肽(COOH-末端36個氨基酸)與凝血酶從抗凝血酶III(AT III)釋放的反應位點肽同源性為53%(4,9) )。HCII中的易斷裂鍵是Leu-Ser,這對于精氨酸特異性蛋白酶抑制劑是不常見的(4,9)。與AT III相比,HCII抑制的僅有凝血蛋白酶是凝血酶,HCII抑制的其他蛋白酶包括α-胰凝乳蛋白酶,中性粒細胞組織蛋白酶G和灰色鏈霉菌蛋白酶B(3)。肝素輔助因子II的主要生理作用可能仍有待發現。

通過修改Griffith等人的方法(9),從新鮮冷凍血漿制備肝素輔助因子II。在SDS PAGE上評估純度,并且基于在肝素存在下的凝血酶抑制來確定活性。HCII以50%(體積/體積)甘油/ H 2 O供應,在-20℃下儲存。

 

 

凝膠

Novex 4-12%Bis-Tris

加載

人肝素輔助因子II,每泳道1μg

緩沖

MOPS

標準

SeeBluePlus 2; 肌球蛋白(191 kDa),磷酸化酶B(97 kDa),BSA(64 kDa),谷氨酸脫氫酶(51 kDa),酒精脫氫酶(39 kDa),碳酸酐酶(28 kDa),肌紅蛋白紅(19 kDa),溶菌酶(14 kDa的)

本土化

等離子體

血漿濃度

90μg/ ml(2)

行動方式

絲氨酸蛋白酶抑制劑; 抑制凝血酶,α-胰凝乳蛋白酶,中性粒細胞組織蛋白酶G,灰色鏈霉菌蛋白酶B

分子量

65,600(2)

消光系數

Ë

1%

1厘米,280納米

 

= 5.93(5)

 

等電點

4.95-5.15(2)

結構體

單鏈糖蛋白,3個潛在的N-糖基化位點,兩個7-氨基酸殘基重復序列,反應位點序列:TVTTVGFMPL-STQVRFTVDR(4)

碳水化合物百分比

9.9%(2)

翻譯后修改

3硫酸化酪氨酸

 

參考

  1. Bringinshaw,GW和Shanberge,JM,Arch。生物化學。Biophys。,161,683(1974)。
  2. Tollefsen,DM,et al。,J.Biol.Chem。Chem。,257,2162(1982)。
  3. Pratt,CW,et al。,Ann。紐約阿卡德。Sci。,556,104(1989)。
  4. Ragg,H.,Nucleic Acids Res。,14,1073(1986)。
  5. Church,FC,et al。,Arch。生物化學。Biophys。,259,331(1987)。
  6. Hortin,G.,et al。,J.Biol。Chem。,261,15827(1986)。
  7. Church,FC,et al。,Proc。國家科。科學院??茖W。美國,82,6431(1985)。
  8. Tollefsen,DM和Blank,MK,J。Clin。Invest。,68,589(1981)。
  9. Griffith,MJ,et al。,J.Biol。Chem。,260,2218(1985)。
  10. Tollefsen,DM,et al。,J.Biol.Chem。Chem。,258,6713(1983)。
  11. 格里菲斯,MJ和Marbet,GA,Biochem。生物物理學。RES。Comm。,112,663(1983)。
  12. Abildgaard,U。和Larsen,ML,Thromb。Res。,35,257(1984)。
  13. Griffith,MJ等,Biochemistry,24,6777(1985)。
  14. Parker,K。和Tollefsen,DM,J.Biol。Chem。,260,3501(1985)。

 

 

出版物

  1. Monteiro,R.,et al。,Biochem。J.(2005)387,871-877。(凝血酶原激活)
  2. Reis,C.,et al。,Biochem。J.(2006)398,295-302(凝血酶原激活)

 

 

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