ComplementTech C5說明書

名稱： C5蛋白

編號： A120

規格： 250 µg/vial

濃度： 1.0 mg/mL (實際濃度見分析證書)

類型 冷凍液體

活動： >值為80%，與正常人血清標準相比。

純度： >95%由SDS-PAGE

緩沖區： 10 mM磷酸鈉，145 mM氯化鈉，pH 7.2

消缺系數。 A280 nm在1.0 mg/mL時的=為1.03

分子量： 190000Da (2鏈)

防腐劑： 無，0.22µm過濾

存儲： - 7 0oC或以下。避免凍融。

根源 正常的人類血清 (經認證的HBsAg、HTLV-I/II、STS和HCV、 HIV1和HIV-II抗體檢測均為陰性) 。

預防措施 在處理人類血液制品時要采取常規的預防措施。

一般說明

天然人類C5是一種天然糖基化 (1.6%) 多肽，包含兩個二硫鍵鏈。C5對于膜攻 擊復合物 (MAC) 的形成是必不ke少的，并可被補體激活的所有三種途徑激活。補體 激活的每個途徑都產生蛋白水解酶復合物 (C3/C5轉化酶) ，它們與目標表面結合   (Ross，G。D. (1986)).這些酶在C5的較大的阿爾法鏈中切割一個肽鍵，釋放高效的 過敏性毒素C5a (74個氨基酸) 并激活C5b。這是C5b-9復合物組裝過程中唯yi的蛋白 水解步驟。C5b是不穩定的，但它仍然與激活復合物結合短暫的時間 (~2分鐘) ，在 此期間，它要么與周圍液體中的一個C6結合形成C5b，6，要么衰變并聚集，不再能夠 形成MAC。C5b，6復合物也可能繼續與C3/C5轉化酶結合，其中單個C7的結合暴露了一 個膜結合區域，而C5b，6,7可以部分插入靶細胞的膽脂層。到目前為止，該復合物可 能會從目標細胞擴散出去，進入附近細胞的細胞膜。這被稱為旁觀者裂解或“反應性 裂解" ，可以是一個重要的病理來源。每個C5b-7復合物都可以結合一個C8蛋白分子 ，從而使該復合物更牢固地插入到細胞膜中。這個復合物與C9結合，每個結合的C9可 以結合另一個C9，起始形成一個包含多達18個C9分子的環狀結構(Podack，E。       R. (1984)).具有一個或多個C9的C5b-9復合物被稱為補體的膜攻擊復合物 (MAC) 。  并不是所有的C5b-8配合物都有完整的C9環，平均每個C5b-8配合物只有3個C9。C9的 完整的蛋白環形成了電子顯微鏡上看到的孔，它們導致代謝物和小蛋白質泄漏出細胞 ，以及水進入細胞。如果將足夠數量的水插入細胞膜，那么由于滲透壓，流入細胞的 水就會使細胞膜破裂，使目標細胞 (或一個旁觀者細胞) 的全部內容物被釋放出來。 任何一種過程都可能導致細胞死亡。最初人們認為每個細胞只需要一個C5b-9復合物( 被稱為裂解的“一打擊理論"(隆美爾F。A.和梅耶爾，M.M. (1973) )，但這可能是不正確的。例如，一個紅細胞需要大約850個C5b-9 復合物，通過C7分子的數量來衡量，才能發生裂解(Bauer，J。以及其他人     (1979)).受CD59保護的抗MAC的宿主細胞需要足夠數量的C5b-9來捆綁所有的CD59 ，然后再捆綁大約850個C5b-9。有核細胞的裂解需要更多的C5b-9復合物，因為 它們的大小和在這些細胞中存在多種防御機制。

物理特性和結構

分子量：  190,000 Da，由兩個二硫鍵連接鏈組成。阿爾法鏈是 115,000 Da ， 貝塔鏈是75,000 Da 。阿爾法鏈和阿爾法鏈是通過一個二硫鍵連接起來的。C5 的 pI為4.7到5.5。

C3/C5轉化酶切割C5，從alpha鏈的n端釋放C5a ( 一個74個氨基酸片段，8268 Da去糖基化，10400+1000糖基化) 。C5b片段 (181,000 Da) 與C6結合，啟動膜攻擊 復合物的自發組裝。

CAS編號：80295-53-0

 測定

C5zui簡單的檢測方法是使用C5耗盡的人血清，并測量EA (經典途徑) 或Er (替 代途徑) 的裂解，作為添加的測試樣品或標準純化C5濃度的函數。每個du特的應用程 序都可能需要確定適當的條件。然而，一個典型的檢測方法包括在濕冰上混合25µL  C5-Dpl，含c5的樣品用GVB++稀釋到1到10 ng C5，以及足夠的GVB++使體積達到300µL 。EA (3 X 107最后加入200µL)。純化的C5或正常的人血清 (NHS) 可作為C5的來源。 將反應混合物在37個條件下孵育30 mino加入C和1 mL的冷GVBE。然后混合反應并離心 ，旋轉未裂解的細胞。然后在415 nm處分析上清液中釋放的血紅蛋白，并與不含C5的 空白細胞 (背景裂解對照) 和用275µL水代替GVB++和25µL C5-Dpl (100%裂解對照)  進行比較。

許多其他的檢測方法已經被描述為使用EA預加載C1 (EAC1細胞) 或預加載經典 途徑C5轉化酶 (EAC1423細胞) 。然而，所有這些檢測方法都需要使用多種純化的補 體成分或更難以制備的試劑(Dodds，A。W.和Sim，R。B. (1997) ；摩根，B。P. (2 000)

參考文獻

Bauer, J., Podack, E.R. and Valet, G. (1979) Determination of the number of lytic sites in biconcave and spheroid erythrocyte ghosts after complement lysis. J. Immunol. 122:2032-2036.

Dodds, A.W. and Sim, R.B. editors (1997) Complement. A Practical Approach (ISBN 019963539) Oxford University Press, Oxford.