cube-biotech PureCube 疏水相互作用瓊脂糖說明書
疏水相互作用
疏水相互作用色譜法是一種成熟的方法，可根據蛋白質的表面電荷和疏水性純化蛋白質。提供疏水表面的色譜基質用于分離。這種方法不需要將任何親和標簽融合到要純化的蛋白質上。因此它適用于天然和重組蛋白的純化。我們提供疏水相互作用基質，其表面具有苯基、辛基或丁基。對于一種新型蛋白質，強烈建議比較不同的基質，并且可以使用含有少量每種基質的 HIC 篩選集。我們的 PureCube 瓊脂糖基于 BioWorks Workbeads，提供高的結合能力和可重復的結果，尤其是在 FPLC 色譜應用中。
PureCube 疏水相互作用瓊脂糖提供：
我們還在一個實用的入門套件中提供所有三種 HIC 瓊脂糖樹脂，用于測試目的。
疏水相互作用 (HIC) 如何用于蛋白質純化？
HIC 分離基于蛋白質的疏水區域與表面上含有疏水基團（例如丁基、辛基或苯基）的色譜介質的相互作用。高離子強度增強了這種相互作用，使 HIC 成為硫酸銨沉淀后或在高鹽緩沖液中從離子交換介質洗脫后的理想純化步驟。
捆綁
蛋白質可能在非常高的鹽濃度下沉淀，因此建議在小規模實驗中測試感興趣的蛋白質是否以結合所需的鹽濃度保持在溶液中。
洗脫
結合的蛋白質可以用低鹽緩沖液洗脫。強烈建議使用鹽梯度（例如硫酸銨或氯化鈉）進行洗脫，以確保蛋白質保持在穩定所需的*佳鹽濃度。
我的蛋白質用哪種基質？
與等電點測定相比，很難預測蛋白質的整體疏水性，因為只有蛋白質表面上的孤立斑塊可能是疏水性的，但足以與 HIC 基質相互作用。因此，建議測試不同的樹脂是否適合以使蛋白質保持在溶液中的濃度結合感興趣的蛋白質，以適合蛋白質穩定性和活性的鹽濃度將其洗脫，同時將其與污染蛋白質分離。PureCube HIC 入門套件是為輕松比較三種不同材料而開發的。
圖 1：疏水相互作用基質中使用的官能團的化學結構。
圖 2：在 PureCube Phenyl Agarose 和競爭產品上純化兩種測試蛋白。對于較大的測試蛋白質（BSA，66 kDa），兩種 HIC 樹脂均獲得了約 25 mg/mL 的樹脂產量。對于較小的測試蛋白（14 kDa），PureCube 基質的產量大約高出 4 倍（PureCube：45 mg/mL，競爭對手 G：11 mg/mL）。純化分批進行，在 1.5 M 硫酸銨、100 mM NaH2PO4、pH 7.0 下結合和洗滌，并在 100 mM NaH2PO4、pH 7.0 下洗脫。E1、E2：洗脫級分 1 和 2。
特征
此列表包括適用于所有 HIC 瓊脂糖產品的功能。如果在特定功能中存在差異，則會提及。
| 用法 | 通過疏水相互作用與蛋白質結合 |
| 特異性 | 蛋白質中的疏水殘基 |
| 流量 | 高達 6 毫升/分鐘 |
| 灌裝量 | 作為 50% 的懸浮液交付 |
| pH 穩定性 | 酸堿度 2-13 |
| 化學基團密度 | 40 微摩爾/毫升 |
| 結合能力 | BSA 25 mg/mL（辛基為 10mg/mL）；溶菌 45 mg/mL（辛基為 20 mg/mL）。 |
| 珠粒大小 | 40微米 |
| 珠配體 | 苯基、辛基或丁基 |
| 所需設備 | -
裂解緩沖液 -
洗滌緩沖液 -
洗脫緩沖液 -
用于 50 mL 管 (min10,000 xg) 和 2 mL 管的冷凍離心機 -
冷凍超高速或超速離心機，容量可達 100.000 xg -
端對端旋轉器 -
2 mL 微量離心管 -
15 mL 聚丙烯管、50 mL 聚丙烯管和 50 mL 聚碳酸酯高速離心管（用于超速離心機） -
微量移液器和微量移液吸頭 -
帶蓋底部出口的一次性重力流柱，2 mL -
?酸堿度計 -
端對端搖床 -
SDS-PAGE 緩沖液、試劑和設備 可選：Western Blot 試劑和設備 |
