targetingsystems蛋白質(zhì)表達(dá)說(shuō)明書

使用 Targefect-293F 高效轉(zhuǎn)染 Free style 293 細(xì)胞 

獲得高水平蛋白質(zhì)表達(dá)的簡(jiǎn)單且經(jīng)濟(jì)的解決方案。 

Targefect-293F 是一種脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，專為高效轉(zhuǎn)染自由式 293 細(xì)胞和懸浮 CHO 細(xì)胞培養(yǎng)物而配制。 

轉(zhuǎn)染方案

Targefect-293FS 試劑應(yīng)在 -20 o C 下冷凍保存。在使用前將試劑解凍至室溫。使用前將試劑全速渦旋 30 秒 2-3 次。

當(dāng) 293S 細(xì)胞生長(zhǎng)到足夠高的密度（50ml 或更多時(shí)為 200 萬(wàn)個(gè)細(xì)胞/ml）時(shí)，繼續(xù)準(zhǔn)備它們以進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。 

取回兩個(gè) 125 毫升康寧搖瓶。

添加足夠的細(xì)胞和培養(yǎng)基，以 110 萬(wàn)個(gè)細(xì)胞/毫升的密度獲得 27 毫升的體積。使用來(lái)自 Invitrogen 的 Freestyle 293 培養(yǎng)基或來(lái)自 Hyclone 的 Transfx-293 培養(yǎng)基。

將燒瓶置于 125rpm 和 8% CO2 的搖床培養(yǎng)箱中。

檢索 GFP DNA 和 Targefect-293FS 試劑。在冰上解凍這兩個(gè)組件。一定要?jiǎng)×覝u旋脂質(zhì) 30-60 秒。

取回兩個(gè) 15 毫升錐形管。在每管中加入 1.5ml 來(lái)自 Invitrogen 的 OPTI-MEM 培養(yǎng)基。將一個(gè)標(biāo)記為 DNA，另一個(gè)標(biāo)記為脂質(zhì)。

在 DNA 管中，添加 30ug GFP DNA 并通過(guò)輕彈管底部進(jìn)行混合。如果您不確定 DNA 的無(wú)菌性，您可以使用注射器和針頭通過(guò) 0.22 微米過(guò)濾器對(duì)其進(jìn)行過(guò)濾。

在脂質(zhì)管中，加入 30ul 的 Targefect-293FS Reagent 并劇烈渦旋混合物 30-60 秒。

讓 DNA 和脂質(zhì)混合物在室溫下孵育 5 分鐘。

在孵育結(jié)束時(shí)，將 DNA 混合物添加到脂質(zhì)混合物中，然后輕彈管底部混合內(nèi)容物。

讓 DNA-脂質(zhì)復(fù)合物在室溫下形成 20 分鐘。

在 20 分鐘結(jié)束時(shí)，將 ~3ml 的 DNA-脂質(zhì)混合物添加到兩個(gè) 125ml 搖瓶中的一個(gè)。標(biāo)記為 GFP 控制。向另一個(gè)搖瓶中加入 3ml OPTI-MEM 并標(biāo)記為 Cell Only Control。

每個(gè)燒瓶中的最終密度應(yīng)為 ~1x10^6 細(xì)胞/毫升。

約 48 小時(shí)后，GFP 對(duì)照燒瓶中的細(xì)胞中應(yīng)出現(xiàn)明顯的綠色熒光。5 天后，兩個(gè)燒瓶之間應(yīng)該有非常明顯的區(qū)別。

在 5 天結(jié)束時(shí)收獲兩個(gè)燒瓶。將細(xì)胞降速并保存 sup。儲(chǔ)存在 4 o C 直到需要。 

使用上述轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率已達(dá)到 90% 以上（使用 GFP 作為標(biāo)記）。請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持以獲取更多信息 1-866-620-4018 注意：對(duì)于轉(zhuǎn)染 HEK-293 細(xì)胞，我們推薦使用Targefect-293 試劑

訂購(gòu)信息 

• Targefect-293F，目錄 #293F-01，1ml --------------------- -- 170 美元

• Targefect=293F，目錄 #293F-10，10 毫升 --------------------------------- 1250 美元