microgembio核酸提取試劑盒

RNA GEM是一種完整的核酸提取試劑盒，提供了一種非常簡(jiǎn)單的方法來從單個(gè)細(xì)胞提取100,000個(gè)細(xì)胞的RNA 。該套件包含無RNase的酶，緩沖液和DNase I，非常適合處理：

• 哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)
• 激光捕獲顯微切割（LCM）

• 熒光激活細(xì)胞分選（FACS）準(zhǔn)備的細(xì)胞群

核糖核酸

從哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，激光捕獲顯微切割和FACS準(zhǔn)備的細(xì)胞群體（例如巨噬細(xì)胞）中提取RNA

適用于RT-PCR和RT-qPCR

每個(gè)試劑盒均包含RNAGEM，DNase I，BLUE緩沖液，10x DNase緩沖液和10x TE

該圖顯示了100、500和1,000個(gè)反應(yīng)試劑

RNA GEM是一種完整的核酸提取試劑盒，提供了一種非常簡(jiǎn)單的方法來從單個(gè)細(xì)胞提取100,000個(gè)細(xì)胞的RNA。該試劑盒包含無RNase的酶，緩沖液和DNaseI。它能夠從哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物，激光捕獲顯微切割和FACS制備的細(xì)胞群（例如巨噬細(xì)胞）中進(jìn)行溫度控制的快速制備RNA。

• 簡(jiǎn)化的手動(dòng)工作流程可在5分鐘內(nèi)提供RT-PCR和RT-qPCR就緒的RNA
• 在廣泛的細(xì)胞數(shù)量?jī)?nèi)以優(yōu)異的線性釋放RNA和DNA
• 無需進(jìn)一步純化RNA即可進(jìn)行準(zhǔn)確的RT-PCR和RT-qPCR分析
• 不含抑制劑意味著無需進(jìn)行苛刻的化學(xué)清洗或多個(gè)步驟
• 減少的處理可保護(hù)樣品的完整性

RNA提取工作流程

*，由于RNA分子的低穩(wěn)定性和大量的RNase，RNA的提取是一個(gè)困難的過程。MicroGEM的RNAGEM通過極快的溫度控制的RNA提取解決了這一問題，該提取可同時(shí)裂解細(xì)胞并消除RNase。RNAGEM試劑盒高度適應(yīng)各種提取體積，并可以根據(jù)細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行縮放。提取后，包括可選的DNase處理以富集RNA。RNA立即可用于下游應(yīng)用，例如RT-PCR和RT-qPCR。可以將這些試劑直接添加到RNA樣品中，以進(jìn)行簡(jiǎn)單的流線型96孔板操作。

RNAGEM經(jīng)過優(yōu)化，可與多種不同的培養(yǎng)類型一起使用，包括懸浮細(xì)胞，貼壁細(xì)胞，RNAlater™中存儲(chǔ)的細(xì)胞，細(xì)胞沉淀以及FACS和LCM。

提取工作流程

所述RNA GEM試劑盒允許總核酸提取或根據(jù)需要的RNA的提取只是。共純化RNA和DNA的方案非常快捷，只需5分鐘即可從樣品變?yōu)楹怂帷为?dú)的RNA可以通過添加DNase（試劑盒提供）進(jìn)行純化，這又會(huì)增加10分鐘的操作時(shí)間。該圖總結(jié)了共純化和RNA提取工作流程。

RNA GEM與聚合酶和逆轉(zhuǎn)錄酶兼容，提取物無需純化即可用于PCR，RT-PCR，qPCR和RT-qPCR。這導(dǎo)致在廣泛的細(xì)胞數(shù)目范圍內(nèi)更高的靈敏度和線性度。

將HeLa細(xì)胞中的5 µl RNA GEM提取物直接添加到RT-qPCR中后，獲得此處的圖  。RNA GEM提取的細(xì)胞數(shù)量為10 – 50,000，  并從高豐度mRNA（ACTB;ß-actin）和低豐度mRNA（BRCA1;乳腺癌早期發(fā)作）生成圖。梯度類似于標(biāo)準(zhǔn)品的干凈痕跡表明沒有抑制作用，從少至10個(gè)細(xì)胞中獲得的圖表明了該方法的靈敏度。

從一系列10-50,000個(gè)細(xì)胞的HeLa細(xì)胞稀釋液中提取的RNA的RT-qPCR圖。A：高拷貝數(shù)mRNA（ACTB）B：低拷貝數(shù)mRNA（BRCA1）。紅色=標(biāo)準(zhǔn)；藍(lán)色=重復(fù)的mRNA曲線。

使用推薦的方法，RNA GEM提取的效率在  1到大約100,000個(gè)細(xì)胞的范圍內(nèi)是恒定的，并具有出色的產(chǎn)量（請(qǐng)參閱下文）。相反，TRIzol®提取會(huì)損失低豐度細(xì)胞的mRNA。這意味著可以通過簡(jiǎn)單的非DNase處理的提取物中g(shù)DNA的qPCR獲得樣品歸一化。